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La transformación es uno de los procesos esenciales en biotecnología o biología molecular para transferir material genético exógeno que ha de atravesar la pared y membranas celulares. La transformación genética de micobacterias introduciendo ADN exógeno entraña ciertas dificultades en comparación con otras especies bacterianas, siendo en algunas ocasiones imposible.

La estrategia de transformación más empleada y funcional en micobacterias es la electroporación. Esta técnica consiste en generar un campo eléctrico sobre las células que incrementa la permeabilidad de la pared celular bacteriana mediante la formación de poros, a través de los que el ADN plasmídico puede introducirse al interior de la bacteria. La obtención de procedimientos que incrementen las eficiencias de transformación genética en micobacterias facilitaría la investigación de estos microorganismos a nivel de biología molecular, siendo relevante en el estudio de patógenos como Mycobacterium tuberculosis o Mycobacteroides abscessus, pero también de micobacterias ambientales de interés biotecnológico.

Las complicaciones para transformar micobacterias están relacionadas con diferentes factores. En primer lugar, la complejidad y grosor de su pared celular micobacteriana actúa como una barrera difícil de penetrar para el ADN. Además, su alta riqueza lipídica convierte su superficie en un entorno altamente hidrofóbico que en una suspensión acuosa tiende a agregar formando acumulaciones con decenas de bacilos, lo que reduce las posibilidades de interacción del plásmido con la bacteria. Las bacterias presentan además sistemas de restricción-modificación, que degradan cualquier secuencia genética que no reconozcan como propia. Por último, las condiciones de electroporación útiles en micobacterias constan de valores de voltaje y resistencia eléctrica altos, lo que incrementa las probabilidades de descarga eléctrica durante el proceso si la suspensión de plásmido contiene elevadas concentraciones de sales.

En este estudio, partiendo de procedimientos ya descritos para la transformación de micobacterias, se han considerado nuevas estrategias metodológicas centradas en reducir el impacto de las limitaciones previamente indicadas, con el objetivo de aumentar significativamente la eficiencia de transformación.

Los resultados del trabajo demuestran que la exposición de las micobacterias a una temperatura de 42ºC es capaz de inhibir en cierto grado sus sistemas de restricción-modificación permitiendo que el ADN no sea degradado tras su incorporación. También se ha observado que la utilización de pequeñas esferas de vidrio es eficaz para deshacer los agregados de micobacterias sin afectar la viabilidad celular, aumentando drásticamente la eficiencia de transformación. Por último, se verificó que el empleo de una columna de desalación de fácil preparación permite la obtención de una suspensión de ADN libre de sales que evita potenciales descargas eléctricas durante la electroporación. El empleo conjunto de estas estrategias mejora las eficiencias de transformación obteniendo valores superiores a los obtenidos con los procedimientos previamente descritos en la bibliografía. El estudio detalla un nuevo procedimiento de transformación de micobacterias que supone una mejora significativa para futuros estudios a nivel genético de estos microorganismos.