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Las variantes genéticas que determinan estos niveles están localizadas, mayoritariamente, en la zona promotora del gen que codifica para el FVII, que es la zona que se encarga de regular la expresión de esta proteína. No obstante, no todas las variantes de esta zona promotora tienen un efecto sobre los niveles de proteína. Par poder averiguar inequívocamente cuáles de las variantes causan un efecto sobre los niveles de la proteína hacen falta estudios funcionales in vitro que, tratando cada variante separadamente, analicen la diferente expresión de cada una en un entorno genético controlado.

Este trabajo muestra los resultados de los estudios de expresión de las variantes del promotor del gen que codifica para el FVII. Para poder conseguir este entorno genético controlado, se construyó un fragmento de DNA artificialmente, en el cual se introdujo el promotor que queríamos estudiar justo delante de un gen denominado “informador” (reporter). Los genes “informadores” se utilizan en el laboratorio para estudiar zonas promotoras, puesto que permiten una fácil cuantificación del producto que codifican. En este caso, el informador utilizado, la proteína verde fluorescente (GFP), se expresaba con diferente intensidad de color dependiendo de las diferentes variantes contenidas del promotor.

De esta manera, generamos diferentes construcciones artificiales con las diferentes variantes genéticas del promotor y las introdujimos en células hepáticas en cultivo (HepG2). Estas células presentaban diferente intensidad de verde según las variantes del promotor que se les había introducido, y la intensidad fue fácilmente cuantificada en un lector de fluorescencia. Mediante esta metodología, encontramos que las variantes –323ins10 y 122C tienen ambas un fuerte efecto reductor de los niveles de proteína plasmática, ya sea individualmente o en combinación con otras variantes del promotor.

Por otro lado, la variante –402A provoca un aumento significativo de los niveles de FVII. Finalmente, la variante –2989A, identificada por primera vez en este estudio, incrementa también de forma muy significativa los niveles de expresión de proteína. No obstante, cuando esta variante se encuentra en combinación con –la 323ins10, su efecto queda totalmente eclipsado. Este fenómeno es importante porque estas dos, al menos en nuestra población, siempre se encuentran juntas, y por lo tanto el efecto de la variante –2989A no podrá ser detectado en estudios poblacionales en nuestra población. De esta manera, este trabajo explica como se han identificado las variantes realmente responsables de la diferente expresión del promotor del gen del FVII.