Preparació de Mostres (SP)

• Fixació amb aldehids
• Fixació amb osmi
• Deshidratació
• Inclusió en resines epòxid (EPON i Spurr) i acrílica (LR White)

Les mostres biològiques requereixen d’un processat particular per tal que sigui possible observar-les al TEM. Un processament complet generalment inclou: fixació amb aldehids, post-fixació amb osmi, deshidratació, infiltració i inclusió en resina i polimerització; resultant en la creació de blocs de resina epòxid que contindran les mostres i seran aptes per ser tallades amb un ultramicròtom. A vegades, es pot donar al cas que no siguin necessaris tots els passos i se’n pot efectuar només una part. 

El Comitè de Bioseguretat de la UAB obliga a entregar fixades les mostres amb risc biològic. 

• Fixació amb aldehids
• Fixació amb osmi
• Assecament de mostres per Punt Crític
• Assecament de mostres per HMDS

Les mostres biològiques requereixen d’un processat particular per tal que sigui possible observar-les al SEM. Un processament complet generalment inclou: una fixació amb aldehids, una post-fixació amb osmi, deshidratació, i un assecat per punt crític o per químic (HMDS). A vegades es pot donar al cas que no siguin necessaris tots els passos i se’n pot efectuar només una part. 

El Comitè de Bioseguretat de la UAB obliga a entregar fixades les mostres amb risc biològic. 

Es realitzen talls semifins (~0.5 um) i ultrafins (~70 nm) tant de blocs de resina epòxid com acrílica. Els ultrafins són les seccions que s’observaran al TEM. 

Immunomarcatge de proteïnes per a observar a microscòpia electrònica, on l’anticòs secundari està conjugat a una nanopartícula d’or. L’SM disposa de diversos anticossos secundaris. 

En el cas de necessitar solucions tampó o de fixació per al previ processat de les mostres, les tècniques de l’àrea ho podran preparar.

El tractament amb descàrrega incandescent elèctrica (glow discharge) s’utilitza per netejar i modificar la càrrega superficial de les reixetes de TEM. D’aquesta manera s’assegura una col·locació precisa de la mostra en la reixeta a més de la correcta vitrificació o tinció i assecat. 

El recobriment de mostres amb or inhibeix l’acumulació de càrrega i el dany tèrmic. A més, donada l’alta conductivitat de l’or, el recobriment permet incrementar la relació senyal/soroll durant l’observació amb microscòpia electrònica de rastreig (SEM), obtenint d’aquesta manera imatge amb millor qualitat. En cas de realitzar estudies analítics (EDX) s’aconsella recobrir les mostres amb carboni.

Per a l’observació amb microscòpia electrònica de transmissió (TEM) les mostres han de presentar una mida de 3 mm de diàmetre i un gruix de 100 nm. Un primer aprimament amb polit pla es realitza per tal de rebaixar la mostra fins a 70 µm. Seguidament amb el polit còncau es realitza l’aprimament de la part central de la mostra fins a gruixos de 15-20 µm.