Àcids Nucleics Quantificació Qualitat
NanoDrop ND-1000
El NanoDrop® ND-1000 és un espectrofotòmetre d’espectre total (220-750nm) que mesura concentracions amb 1µl de mostra, amb gran exactitud i reproductibilitat. Utilitza una nova tecnologia que usa la tensió superficial per mantenir la mostra en el seu lloc i s’eliminen les cubetes de mesura. A més a més, el ND-1000 té la capacitat de mesurar mostres molt concentrades, sense necessitat de diluir-les (accepta 50X més de concentració que les mesures estàndards amb cubetes). Aquestes característiques el fan idoni pel mesurament de la concentració d’àcids nucleics i per a determinar la seva qualitat.
El software calcula automàticament la concentració dels àcids nucleics seguint la relació:
- 1 A260nm = 1 OD DNA = 50 µg/ml
- 1 A260nm = 1 OD RNA = 40 µg/ml
La concentració de proteïna es pot calcular per mostres a les quals els hi hem aplicat el mètode de Bradford, Pierce, Lowry, BCA o la mesura directa d'absorbància a 280 nm. En aquest darrer cas, s'assumeix la següent relació entre absorbància i concentració de proteïna:
- 1 A280nm = 1 mg/ml
Tanmateix, es pot ajustar el coeficient d'extinció molar per a qualsevol proteïna. A més, l'aparell permet la conversió automàtica d'absorbància en concentració per mostres de BSA, Lisozim i IgG.
Equip: NanoDro ND-1000
LabChip
El Bioanalyzer utilitza l’electroforesi capil·lar per separar els àcids nucleics i determinar el seu nivell d’integritat (mesura de la qualitat) i la quantitat.
És un mètode molt sensible i empra un sol microlitre de mostra, per això està molt indicat quan tenim molt poca quantitat de mostra, o bé la mostra és molt valuosa o està poc concentrada.
La detecció és per la fluorescència dels colorants propis d’Agilent que s’intercalen entre les molècules dels àcids nucleics.
Equip: Agilent 2100 Bioanalyzer
Kits: DNA HS (11 mostres), DNA 1000 (12 mostres), RNA 6000 Nano (12 mostres)
Qubit
El Qubit és un espectrofotòmetre que utilitza fluorocroms específics per a mesurar àcids nucleics i proteïnes. A diferència del Nanodrop, el Qubit permet la quantificació de cadena simple o doble de DNA, la qual cosa fa que la mesura sigui molt més acurada. Les mesures al Qubit necessiten d'una preparació prèvia de la mostra i de l'elaboració d'una recta patró.
Cal considerar en els assajos de DNA de doble cadena que la concentració mesurada al Nanodrop pot arribar a ser fins a 10 vegades superior que la mesurada al Qubit. Per tant, s'ha de tenir en compte aquest efecte a l'hora de mesurar la concentració d'una mostra.
Equip: Qubit 2.0
Kits: dsDNA HS Assay: 0.2–100 ng
dsDNA BR Assay: 2–1000 ng
ssDNA Assay: 1–200 ng
RNA Assay: 5–100 ng
RNA BR Assay: 20–1000 ng (Només Autoservei)
Protein Assay: 0.25–5 µg (Només Autoservei)